無菌技術(shù)消毒的條件？

一、無菌條件一般指操作的環(huán)境、機具、器材等應是無菌和潔凈度高的。無菌操作是在無菌條件下進行技術(shù)作業(yè)。在無菌操作過程中，應排除人為帶菌的因素，提供的菌種也應是純度高、無污染的。它們是同一概念的兩個方面。

（1）培養(yǎng)基的無菌要求

無菌措施：

①培養(yǎng)基要優(yōu)質(zhì) 配料無霉變，分散度好，加水拌制時，水分應充分滲透入料內(nèi)，無外濕內(nèi)燥的塊狀物。

②滅菌務(wù)須徹底 嚴格滅菌操作規(guī)程，確保滅菌的時間和溫度，杜絕滅菌“死角”。

③適當應用添加劑 實踐證明，添加適量的抑菌消毒劑，能有效地提高滅菌效果。諸如在培養(yǎng)基中拌入托布津、克霉王拌料劑、木材熏蒸物等，不但滅菌效果明顯，而且可縮短滅菌時間。

無菌效果檢驗：每個菌種生產(chǎn)者，當在采用一種新的培養(yǎng)基或使用新的滅菌設(shè)備等情況下，一定要通過科學的方法對滅菌效果進行檢驗。如滅菌結(jié)束后，在鍋內(nèi)的不同位置，抽取若干支試管或料瓶（袋），貼上標簽，置25～30℃下培養(yǎng)6天后進行檢查，如果所有抽樣表面和內(nèi)部均無任何變化，則表明滅菌效果良好，可供接種使用；相反，如果部分抽樣出現(xiàn)了雜菌污染，這就要進行科學分析，找出原因，進行改進。

（2）接種環(huán)境的無菌檢驗

接種室（箱）在每次接種前均要進行消毒滅菌，其效果受藥劑的有效期及其他因素的影響，不一定穩(wěn)定，因此應定期進行消毒效果和空氣污染程度的檢驗，以便針對問題，及時改進消毒措施和操作方法。

檢驗方法：常用的方法有平板法和斜面法兩種。一般是采用常規(guī)法配制的肉湯瓊脂或馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中，制成6個平板，打開其中3個并同時放入接種室（箱）的不同地方，暴露一定時間后重新蓋上，另3個不打開皿蓋作為對照組，然后將兩組一起置于30℃下培養(yǎng)，48小時后檢查有無菌落出現(xiàn)。

檢驗結(jié)果：平板或斜面在30℃下培養(yǎng)48小時后取出觀察。根據(jù)有無菌落、菌落個數(shù)和形態(tài)，來判斷空氣被污染的程度和雜菌種數(shù)。其合格標準是：平皿打開蓋5分鐘不超過3個菌落；斜面打開棉塞30分鐘不長菌落。若生長的菌落超過此數(shù)字，則要采取措施來提高滅菌效果。從菌落形態(tài)來看，如果是霉菌據(jù)多數(shù)，可先用5%碳酸對接種室（箱）進行全面噴霧，再用福爾馬林熏蒸；如果是細菌居多數(shù)，用乳酸和福爾馬林交替熏蒸，效果更好。

（3）無菌操作的要求

有了良好合格的無菌條件，而作業(yè)時不認真、不規(guī)范，也易引起染菌。因此，應做好以下幾點：

①練好基本功 操作前應事先經(jīng)過嚴格的技術(shù)訓練，牢固樹立無菌概念，掌握熟練的技能、技巧。

②嚴防交叉感染 操作人員雙手易被接觸的物品、工具、棉塞、瓶袋等所停留的雜菌污染，引起操作中交叉帶菌。因此，操作前，瓶袋等必須用消毒藥物噴霧、揩拭，工具、棉塞需灼燒滅菌。

③降低灰塵量 工作人員是無菌室內(nèi)更大的灰塵源，因此操作空間應保持相對靜止，杜絕增加灰塵量的動作，操作中要求細心、快速、輕巧，工作服選用灰塵量少的織物量體裁制。

④杜絕菌種帶菌 供擴制用的母種或原種要求純度高、菌齡短，使用前應嚴檢查、挑選，凡不合格或有疑慮的一概棄之不用。

二、要在寬敞明亮的空間，空氣消毒30分鐘